диагностика
Neisseria gonorrhoeae / Chlamydia trachomatis . Такие тесты ускоряют и упрощают диагностический алгоритм .
— Какие еще виды тестов актуальны для клинической лабораторной диагностики в настоящее время ?
— Кроме прямых , амплификационных методов в диагностике урогенитальных заболеваний широко применяются косвенные , серологические методы , определяющие специфические антитела . Наиболее распространенным из них является иммуноферментный анализ ( ИФА ). Это высокочувствительный и высокоспецифичный метод лабораторного исследования , основанный на специфическом связывании антигенов и антител в пробе с дальнейшим выявлением их ферментной меткой .
Принцип ИФА заключается в иммобилизации антигена на « твердой фазе » ( полистироловом носителе ) и формировании иммунного комплекса при внесении биоматериала , содержащего специфические антитела . В дальнейшем образовавшийся иммунный комплекс выявляется ферментной меткой , и полученное окрашивание измеряется спектрофотометрически .
— Что можно отнести к достоинствам и недостаткам метода ?
— К достоинствам метода относятся : высокая чувствительность – 10 -9 г / л ; высокая специфичность – 97-99 %; возможность исследования как антигенов , так и антител ; проведение качественного и количественного вариантов исследования ; наличие экспресс-тестов ; полная автоматизация всех этапов теста . Серологические ИФА методы позволяют определять ранние антитела класса IgM , поздние антитела классов IgG и IgA , а также авидность IgG для уточнения сроков инфицирования и давности заболевания . Низкий индекс авидности ( как правило , ниже 30-40 %, но для каждой инфекции это значение индивидуально ) указывает на первичную активную инфекцию давностью не более шести месяцев . Тогда как высокий индекс авидности характеризует давнее инфицирование , возможно , хронический или латентный патологический процесс .
Конечно , метод имеет и недостатки : наличие ложноположительных результатов , требующих проведения дорогостоящих референс-исследований ; возможность использования только жидкого и прозрачного биологического материала . Поэтому взятие крови для исследования должно проводиться с помощью вакуумных систем , биоматериал нужно транспортировать в охлажденном до -4˚С состоянии и хранить при + 4˚С не более 48 часов или при замораживании -20˚С до шести месяцев , повторное замораживание образцов не допускается . Также ограничением иммуноферментного анализа является то , что метод косвенный , т . е . исследуются специфические антитела , а не сам возбудитель . Поэтому при иммунодефицитных состояниях , нарушении синтеза антител серологический метод может дать ложноотрицательный результат .
— По аналогии с ПЦР также хотелось бы задать вопрос об ошибках при проведении исследования .
— При постановке ИФА они делятся на : ошибки преаналитического , аналитического и постаналитического этапов . Ошибки преаналитического этапа включают в себя неправильное взятие биологического материала , нарушение условий его хранения и транспортировки . На аналитическом этапе ошибки связаны с неправильным разведением и дозированием образца ; несоблюдением температуры и влажности в лаборатории ; нарушением технологии промывания , являющимся обязательным этапом протокола исследования . На постаналитическом этапе ошибки связаны с неверной интерпретацией результатов ИФА . Ведь наличие специфических антител к возбудителю не всегда свидетельствует об активном патологическом процессе , требующем лечения .
Однако , несмотря на некоторые недостатки и ограничения , серологический метод широко применяется при диагностике урогенитальных инфекций . Например , скрининговая и подтверждающая диагностика сифилиса основана только на серологических методах , т . е . на выявлении специфических антител . Серология является дополнительным , уточняющим методом при диагностике хламидиоза , уреаплазмоза , микоплазмоза , трихомониаза и кандидоза . При этих заболеваниях ИФА позволяет уточнить стадию заболевания и наличие специфического гуморального иммунного ответа .
— В некоторых случаях при одновременном использовании ПЦР и ИФА методов между их результатами бывают противоречия . Как интерпретировать такие результаты ?
— Первый возможный вариант : прямой амплификационный метод – отрицательный , косвенный серологический метод – положительный . В данном случае противоречия нет : антитела сохраняются до нескольких месяцев после перенесенной инфекции и успешного лечения . Авидность антител будет при этом высокой . Исключение составляет диагностика сифилиса : положительный серологический тест подтверждает заболевание ( пока без уточнения стадии ), и постановка прямых методов не требуется .
Второй , более редкий вариант : амплификационный метод – положительный , серологический – отрицательный . Возможные причины : cовпадение времени проведения исследования с фазой серологического « окна », когда антитела еще не вырабатываются , а возбудитель уже активно реплицируется , или уровень антител ниже порога чувствительности тестсистемы . Коинфицирование несколькими урогенитальными инфекциями может привести к супрессии синтеза антител и ложноотрицательным серологическим тестам . Также урогенитальные заболевания , особенно микст-инфекции , могут сопровождать иммунодефицитное состояние с нарушением гуморального ( антительного ) иммунного ответа .
Необходимо помнить , что при получении сомнительных или противоречивых данных лаборатория оставляет за собой право перепроверить исследование и задержать выдачу результата для исключения ошибки на аналитическом этапе .
Таким образом , грамотный выбор лабораторных тестов диагностики урогенитальных инфекций врачом-клиницистом позволит получить прецизионный результат , сократить диагностический алгоритм до минимума и избежать ошибок при интерпретации полученных анализов .
Елена Рычкова
№ 8 ( 40 ) 2018 39