диагностика
Лабораторные тесты при диагностике урогенитальных инфекций
Ягудина Лейла Асхатовна доцент кафедры клинической лабораторной диагностики КГМА – филиала ФГБОУ ДПО РМАНПО МЗ РФ , врач клинической лабораторной диагностики высшей квалификационной категории , врач – аллерголог-иммунолог , кандидат медицинских наук
Диагностика урогенитальных заболеваний , особенно инфекционных , представляет собой актуальную проблему . В этой связи представляется интересным узнать , каковы диагностические возможности тестов , применяемых для выявления урологических инфекций , в чем их достоинства и ограничения применения , как выбрать оптимальный алгоритм исследования , чтобы провести первичную диагностику , мониторировать ход лечения , контролировать излеченность . Кроме того , в процессе проведения диагностических тестов не исключены ошибки на этапе подготовки пациента и в процессе лабораторной работы , поскольку врач клинической лабораторной диагностики играет здесь немаловажную роль . Эти и другие вопросы мы обсудили в интервью с доцентом кафедры клинической лабораторной диагностики КГМА – филиала ФГБОУ ДПО РМАНПО МЗ РФ , врачом клинической лабораторной диагностики высшей квалификационной категории Лейлой Асхатовной Ягудиной .
— Лейла Асхатовна , какие тесты сегодня используются для диагностики урогенитальных инфекций ?
— Диагностика инфекций всегда этиотропна . Однако многие урогенитальные инфекции протекают однотипно , часто малосимптомно , что затрудняет клиническую диагностику . Значит , кроме клинического осмотра , « картиносоздающих » методов и общих лабораторных анализов , необходимы тесты , выявляющие этиологический фактор заболевания . Этиология урогенитальных инфекций может быть различна : бактериальные , вирусные , грибковые , а чаще всего микст-поражения . Вместе с тем лабораторная диагностика предлагает огромное количество современных высокотехнологичных тестов .
Самым распространенным и востребованным тестом диагностики урогенитальных инфекций является полимеразная цепная реакция ( ПЦР ). Метод был создан в 1983 году Кэри Мюллис . Принцип основан на амплификации ДНК в ходе многократных последовательных удвоений исходного выбранного ( специфического ) фрагмента ДНК с помощью фермента ДНК-полимеразы . В отличие от репликации живых организмов , с помощью ПЦР амплифицируются относительно короткие участки ДНК – обычно не более 3000 пар нуклеиновых оснований .
— Каковы особенности процедуры проведения ПЦР-исследования ?
— Сама реакция проводится в три этапа : пробоподготовка , амплификация и учет результатов .
Суть пробоподготовки заключается в экстракции ( извлечении ) ДНК из биопрепарата и удалении или нейтрализации посторонних примесей для получения препарата ДНК с чистотой , пригодной для постановки ПЦР . Для проведения второго этапа , амплификации , необходимо отграничить ( фланкировать ) тот специфический участок ДНК , который в дальнейшем будет амплифицироваться . Отграничение осуществляется с помощью праймеров – искусственно синтезированных олигонуклеотидов , имеющих , как правило , размер от 15 до 30 пар нуклеотидов , идентичных соответствующим участкам ДНК-мишени . В свою очередь этап амплификации состоит из 3 циклов : 1 ) денатурация двухцепочечной ДНК ; 2 ) отжиг праймеров ; 3 ) комплементарное достраивание цепей ДНК из смеси дезоксинуклеотидтрифосфатов с помощью фермента Taq-полимеразы . На каждом цикле количество синтезированных копий фрагмента ДНК удваивается . Таким образом , в течение 30-35 циклов амплификации образуется достаточное для детекции количество « ампликонов » – искомых фрагментов ДНК .
Третий этап , учет результатов , может проводиться электрофоретически , по « конечной точке » или в режиме реального времени – real time . Метод электрофореза в агарозном геле трудоемок и , несмотря на высокую разрешающую способность , применяется в основном в судебно-медицинской практике . При учете результатов по « конечной точке » берется во внимание флуоресцентный сигнал после проведения амплификации ; этот метод позволяет делать только качественный анализ .
№ 8 ( 40 ) 2018 37